Applied Biosystems實時熒光定量PCR儀
StepOne Plus快速實時熒光定量PCR儀
StepOne Plus實時熒光定量PCR儀是Applied Biosystems首款采用觸摸屏控制、VeriFlex溫度梯度控制模塊的qPCR，支持快速PCR反應和四重熒光定量分析。本欄目提供其配置及OQ/IQ服務套餐方案。
設備名稱：實時熒光定量PCR儀 qPCR儀 real-time PCR system
制 造 商：美國Thermo Fisher公司 產地：新加坡
品 牌：Applied Biosystems（AB）
型 號：StepOne（48×0.1mL）
StepOne Plus（96×0.1mL）
技術詳情：見［技術規格］
商品報價：見［訂貨指南］
主要功能用途
StepOne Plus系列實時熒光定量PCR儀是Applied Biosystems第一款采用觸摸屏操作控制、引入VeriFlex溫度梯度控制模塊的qPCR平臺。可實現在同一次實驗中分別設置6組不同引物退火溫度以確立最佳擴增條件，升溫速度快可支持快速PCR反應（StepOne不適用）。采用4組熒光檢測通道（StepOne為3通道），可實現多重熒光定量分析檢測。
主要應用包括：
1、基因表達分析
動植物和微生物在生理病理、環境及外來脅迫下相關基因表達的變化分析以及SiRNA誘導基因沉默和基因敲除后特定基因表達水平的檢測。
2、miRNA表達水平的檢測
基于miRNA與特定靶基因mRNA表達水平變化間的關聯，研究miRNA 調控基因表達機制。
3、基因分型（SNP genotyping，Genotyping）
利用TaqMan探針、飽和DNA染料HRM曲線分析進行基因分型，得出等位基因頻率、基因型占總基因型比率等。可應用于如遺傳病診斷，SNP基因分型，藥物代謝酶DME基因分型，法醫遺傳學鑒定等。
4、拷貝數變異(CNV)
拷貝數變異(Copy number variation, CNV)是指因基因組發生重排而導致長度1KB以上的基因片段的缺失（減少）、插入、重復（增加）、重排、倒 位、DNA 拷貝數目變化，也稱為拷貝數多態性(copy number polymorphisms, CNPs）。是造成物種個體差異和人類許多疾病（如癌癥、遺傳性疾病、心血管疾病）的一種重要遺傳基礎。熒光實時定量PCR檢測初始樣品的某個DNA 片段的拷貝數進行定量，用已知拷貝數為2的DNA內參校正而實現對目DNA 片段拷貝數的確認。
5、高分辨率溶解曲線分析（High resolution melt， HRM）
DNA序列長度、GC 含量及堿基互補性差異影響DNA雙鏈結構的熱穩定性。高分辨熔解曲線(high-resolution melt，HRM) 分析是通過實時監測升溫過程中與雙鏈DNA特異性結合的熒光染料釋放的綠色熒光強度的變化，了解PCR 產物中DNA分子的解鏈溫度情況，分析樣品特定基因片段DNA組成變化。實時熒光定量PCR實驗運行程序中引入溶解曲線分析環節后，可借助于專用HRM分析模塊完成HRM分析。HRM用于突變掃描和基因分型，不受突變堿基位點和種類限制，既可對未知突變進行篩查、掃描，又能對已知突變進行分析，還可用于STR分析。
6、病原體檢測（Pathogen detection）
實時熒光定量PCR儀能可靠用于臨床醫學人體上呼吸道的感染、肺炎、消化道感染、中樞神經系統等疾病，以及畜牧業、農作物病蟲害的病原體的檢測確認、感染嚴重程度的量化評估。
7、蛋白熱穩定性分析（Protein thermal shift）
利用實時定量PCR儀來分析熱穩定性，進行配體-蛋白結合的高通量篩選，突變或修飾對蛋白熱穩定性的影響
使用蛋白結合染料（如Protein Thermal Shift 染料），實時定量PCR系統上運行實時熔解實驗，根據因蛋白熔解導致熒光圖像差異，分析配體與蛋白的結合穩定性。可用于以高通量篩選配體與蛋白的結合， 篩選能與蛋白靶點結合的小分子和片段文庫候選藥物、抗體，鑒定最佳緩沖液條件以改善蛋白的純化和分離等。
8、食品安全和GMO(genetically modified organism)檢測
實時熒光定量PCR技術用于食品的微生物污染監測、肉食類食品食材來源和組成的檢驗、如轉基因動植物基因的檢測等。
9、耐藥基因檢測等
性能特點
StepOne Plus實時熒光定量PCR儀具有直觀簡便的操作界面和的實驗設置向導，既可以通過彩色觸摸屏操作，也可與PC聯機采用StepOne Software進行實驗操作和數據分析處理。精確溫控反應模塊及先進光學檢測單元，支持廣泛的研究和檢測應用。
1、功能強大、操作簡便的StepOne軟件
PCR實驗步驟實驗設計向導，引導用戶執行實驗的各個步驟，包括樣本和反應設置、熱循環和熒光檢測等。高級設置適用于進行更復雜應用(如多重反應)的高級用戶；
實時監視擴增增長曲線，即時查看實驗進程；
還可通過一臺遠程計算機實時查看擴增實驗進程，并在運行完成時通過電子郵件提醒通知；
自動基線和白動閾值功能令數據分析得以簡化；
自動單核苷酸多態性基因分型識別功能，具有直觀的圖表輸出和量值分配特性；
當查看擴增曲線或單核苷酸多態性基因分型圖譜時，易于識別樣本反應孔；
StepOne軟件支持包括標準曲線絕對定量、比較Ct(ΔΔCt)相對定量、等位基因鑒別（SNP Genotyping)、陽性/陰性等多種分析方法；
StepOne Software軟件集成高分辨率熔解曲線(High Resolution Melt/HRM)應用模塊。HRM 軟件改進聚類算法，提高了靈敏度和準確性，并能夠對單個板上運行的多個檢測進行單獨分析。
還可選擇符合MIQE 標準的實時熒光定量PCR數據標記語言(RDML)格式輸出實驗數據
2、VeriFlex 梯度控溫技術
StepOne Plus的96孔反應模塊采用Veriflex梯度溫控技術，具有六個獨立的溫度區，可實現精準的溫度控制和優化。
3、多重實時定量分析功能
具有最多可支持4個靶標的多重實時熒光定量檢測功能。
主要技術規格
Applied Biosystems提供的StepOne系列實時熒光定量PCR儀分為StepOne Plus、StepOne兩款。二者的樣品反應模塊、熒光檢測通道數量均存在一定差異。
型號 | StepOne Plus（4熒光通道） | StepOne（3熒光通道） |
樣品通量 | 96孔×0.1 mL | 48孔×0.1 mL |
支持的耗材 | 0.1mL 96孔反應板與光學蓋膜 0.1 mL96孔反應板與光學平蓋 0.1 mL 8連管與光學平蓋 0.1 mL單管與光學平蓋 | 0.1mL 48孔反應板與光學蓋膜 0.1 mL 48孔反應板與光學平蓋 0.1 mL 8連管與光學平蓋 0.1 mL單管與光學平蓋 |
反應體積 | 10～30μL | |
熱循環控溫類型 | Peltier-Based System | |
溫度梯度分區功能 | 6個可獨立控制的溫控區域 | - |
最大模塊變溫速率 | 6.5℃/秒 | 4.6℃/秒 |
最大樣品變溫速率 | 快速模式2.2℃/秒； 標準模式1.6℃/秒 | |
溫度準確度 | ±0.25℃ (35℃至95℃范圍時鐘啟動后3分鐘開始測量) | |
溫度均一性 | ±0.4℃(35℃至95℃范圍時鐘啟動后30秒測量) | |
PCR完成運行時間 | <30分鐘運行 | <40分鐘運行 |
光學檢測性能 | ||
激發光源 | OptiFlex Blue LED光源 | LED |
激發/檢測波長范圍 | 450–600 nm/500–640 nm | |
熒光檢測通道 | 4個熒光通道 | 3個熒光通道 |
熒光激發波長 | 4組激發濾光片 CH1：470±15nm CH2：520±10nm CH3：550±10nm CH4：580±10nm | 3組激發濾光片 CH1：470±15nm CH2：520±10nm CH3：580±10nm |
熒光檢測波長 | 4組發射濾光片 CH1：520±15nm/適用于FAM/SYBR Green(預校準)；SYT09 CH2：558±12nm/適用于VIC/ JOE (預校準)；HEX, TET CH3：587±10nm/適用于NED/TAMRA /ABY (預校準)；Cy3 CH4：623±14nm/適用于JUN/ROX(預校準)；Texas Red | 4組發射濾光片 CH1：520±15nm/適用于FAM/SYBR Green(預校準)；SYT09 CH2：558±12nm/適用于VIC/ JOE (預校準)；HEX, TET CH3：623±14nm/適用于JUN/ROX(預校準)；Texas Red |
多重分析能力 | 最多4個靶點 | 最多3個靶點 |
動態范圍 | 9個數量級的線性動態范圍 | |
靈敏度 | TaqMan單一報告基因分析30μL體系中檢測1拷貝RNaseP模板 | |
精密度 | 分辯5000至10000個RNaseP模板拷貝(置信度997％) | |
運行時間 | 快速PCR模式：完成40個循環的反應＜40分鐘 標準PCR模式：完成40個循環的反應＜2小時 | |
安裝運行條件
StepOne Plus實時熒光定量PCR儀在海拔2km以下使用
工作環境溫度：15℃ ~ 30℃（推薦）
工作電源：100-240V/50-60Hz/10A；960 W
相對濕度范圍：15 ~ 80%R.H.
主機重量：23.6 kg
外觀尺寸尺寸（W×D×H）：270×500×400 mm
組成配置
Applied Biosystems StepOne Plus實時熒光定量PCR儀由定量PCR儀主機、外置電腦工作站、PCR Starter Kit和隨機軟件包（StepOne Real-Time PCR System Software、Primer Express Software)等組成。
主機標準附件包括電源電纜（power Cable）、USB數據線（StepOne system Cable）、網線（Ethernet cable）和USB drive（含電子文檔）。
Applied Biosystems 提供了HRM分析軟件和SEA審計管理軟件可供選擇。
選配USB接口的無線網卡，便于將實驗數據聯網傳輸。
品名 | 品牌 | 貨號 | 規格 | 中文描述 | 單價 |
HRM分析功能軟件 | Applied Biosystems | 4486395 | Each | HRM Software Module for QuantStudio 6 and 7 Systems | 詢價 詢價 |
21CFR Part11審計管理軟件 | Applied Biosystems | 4486400 | Each | 21CFR Part11 Software Module For QuantStudio 6 and 7 Systems | 詢價 詢價 |
WiFi網絡模塊 | Applied Biosystems | A26774 | each | High-Power USB Wi-Fi Module, Maximum speed up to 300 Mbps. Use with SimpliAmp ProFlex, QuantStudio 1/3/5. | 詢價 |
基本耗材
StepOne Plus、StepOne兩款實時熒光定量PCR儀分別配置的是96×0.1 mL、48×0.1 mL的快速反應模塊。適用于快速熒光定量PCR管、PCR聯排管或PCR板。
為使得反應管、反應板與反應模塊的緊密貼合、熱傳導效率均勻一致，建議采用通過Applied Biosystems儀器兼容性測試的 MicroAmp系列，以確保獲得精確、可重復的PCR實驗結果。
品名 | 品牌 | 貨號 | 規格 | 描述 | 報價 |
96孔快速熒光定量PCR板 | Applied Biosystems | 4346907 | 10板/盒 | MicroAmp EnduraPlate Fast Optical 96-Well Reaction Plate, 0.1 mL | 詢價 |
快速熒光定量PCR板 彩色組合裝 | Applied Biosystems | 4483493 | 5板/盒 | MicroAmp EnduraPlate Optical 96-Well Fast Multicolor Reaction Plates with Barcode | 詢價 |
定量PCR 8聯平蓋 | Applied Biosystems | 4323032 | 300條/盒 | MicroAmp Optical 8-Cap Strips，Flat , Clear | 詢價 |
快速熒光定量PCR單管 | Applied Biosystems | 4358297 | 1000 支/盒 | MicroAmp Fast Reaction Tube with Flat Cap, Clear, 0.1 mL | 詢價 |
定量PCR封板膜 | Applied Biosystems | 4360954 | 25張/盒 | MicroAmp Optical Adhesive Film | 詢價 |
48孔快速熒光定量PCR板 | Applied Biosystems | 4375816 | 20板/盒 | MicroAmp Fast Optical 48-Well Plate | 詢價 |
48孔定量PCR板封膜 | Applied Biosystems | 4375928 | 25張/盒 | MicroAmp 48-Well Optical Adhesive Film | 詢價 |
訂貨指南
Applied Biosystems StepOne Plus系列實時熒光定量PCR儀提供無電腦工作站、帶臺式電腦或便攜式電腦工作站三種配置套裝。電腦工作站預裝有StepOne Software、Primer Express Software應用軟件。
序號 | 品名 | 貨號 | 套裝配置描述 | 報價 |
1-1 | Stepone Plus 實時熒光定量PCR儀 | 4376600 | Applied Biosystems StepOne Plus Real-Time PCR System Includes： StepOne Plus qPCR instrument with 96-well Fast VetiFlex Block StepOne Plus Starter Kit | 詢價 詢價 |
1-2 | StepOnePlus實時熒光定量PCR 工作套裝 | 4376599 | Applied Biosystems StepOne Plus Real-time PCR Systems Includes： Stepone Plus qPCR System (4376600) Dell tower computer | 詢價 詢價 |
1-3 | StepOnePlus實時熒光定量PCR 工作套裝 | 4376598 | Applied Biosystems StepOnePlus Real-time PCR Systems Includes： Stepone Plus qPCR System (4376600) Dell laptop computer | 詢價 詢價 |
2-1 | Stepone實時熒光定量PCR儀 | 4376357 | Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR System Includes： StepOne qPCR instrument with 48×0.1mL Block StepOne Plus Starter Kit | 詢價 詢價 |
2-2 | StepOne實時熒光定量PCR 工作套裝 | 4376374 | Applied Biosystems StepOne Real-time PCR Systems Includes： Stepone qPCR System (4376357) Dell tower computer | 詢價 詢價 |
2-3 | StepOne實時熒光定量PCR 工作套裝 | 4376373 | Applied Biosystems StepOne Real-time PCR Systems Includes： Stepone qPCR System (4376357) Dell laptop computer | 詢價 詢價 |
對于有GLP、FDA、CFDA管理合規要求的實驗，Applied Biosystems為StepOne、StepOne Plus實時熒光定量PCR儀提供了專門的2Q驗證服務套餐。
序號 | 品名 | 貨號 | 套裝配置描述 | 報價 |
3-1 | StepOne IQ/OQ服務套餐 | 4413678 | IQ/OQ,SVC StepOne | 詢價 |
3-2 | StepOne Plus IQ/OQ服務套餐 | 4415138 | IQ/OQ,SVC StepOne Plus | 詢價 |
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